聚合酶連鎖反應是分子生物科技,用來增加特定DNA片段。
聚合酶連鎖反應主要以人工熱循環,模彷DNA複製,大量複製DNA片段。以下簡單介紹PCR的原理。1條DNA通過PCR可以複製過百萬條DNA片段。
需要的材料:
(1) Taq聚合酶: 可以抵受PCR中高溫的酶,用來引導核苷三磷酸連接到DNA上。
(2) DNA引物: 由十幾個核苷酸組成。作爲DNA複製的起始點。DNA引物有一對,分別為前置引子及反置引子。
(3) 核苷三磷酸(dNTP): 模彷自由核苷酸,連接上分開的DNA雙鏈上。
(4) 緩衝溶液: 提供合適的環境,令Taq聚合酶有最高的活性及穩定性。
步驟及原理:
(1) 將水、緩衝溶液、引物、核苷三磷酸、Taq聚合酶及DNA加入PCR離心管,放入PCR機中。
(2) PCR機會不斷重覆幾個溫度循環大約25-35次,分別是: 96°C、55-65 °C 及72°C 。
(3) 96°C 變性: 高溫令到DNA雙鏈分開,令到引物及核苷三磷酸有空間可以連接。
(4) 55-65 °C 引子黏合: 引子會連接上DNA複製的起始點。
(5) 72°C延展: 核苷三磷酸會扮演自由核苷酸,以互補原則連接到DNA上。
(6) 不斷重覆(3)-(5), DNA會由1條變成2條,2條變4條,4條變8條。到了第35個循環,便會有34359738368條DNA。
基礎知識(1): DNA結構 與 核苷酸
基礎知識(2): DNA複製
生物科技(1): 抽取DNA
生物科技(2): 凝膠電泳
物種鑑定